I. Kurzbeschreibung des Forschungsfeldes Ziel des Forschungsvorhabens sind zelluläre und molekulare Untersuchungen zur Rolle extrazellulärer Vesikel (EVs) für die Kommunikation von Hautzellen im Kontext der Wundheilung (s. Arbeitsprogramm der Projektbeschreibung). Von zentraler Bedeutung hierfür ist die Isolierung und nachfolgende Analyse von EVs aus den Kulturüberständen stimulierter, primärer Keratinozyten und humaner mesenchymaler Stammzellen mithilfe des MACSQuant Analyzers. EVs stellen wegen ihrer geringen Größe, ihres speziellen Aufbaus und der Notwendigkeit einer zuverlässigen Erkennung als Voraussetzung für eine effiziente Anreicherung besonders hohe Anforderungen an das Durchflusszytometer. II. Bedarf Der Durchflusszytometer muss zwingend folgende Anforderungen kumulativ erfüllen: - Zuverlässigen Erfassung besonders kleiner EVs (z.B. Exosomen), sowie sämtlicher Unterformen von EVs - Schonende Isolierung, Anreicherung und sofortige Analyse von EV´s aus Kulturüberständen, um darin enthaltene microRNAs untersuchen zu können. - Anreicherung von Zellen und ihrer Subpopulationen aus Mischkulturen, um diese einer differentiellen Analyse unterziehen zu können. - Untersuchungen zur Übertragbarkeit der Resultate aus THP-1-Monozyten-Monokulturen auf primäre, humane Zellen aus Vollblut (PBMC). III. Technische Eigenschaften des Miltenyi MAC SQuant Analyzer 16 Durchflusszytometers Miltenyi Biotec ist Hersteller und einziger Anbieter des MACSQuant Analyzer 16 und MACS MiniSampler Plus. Die Geräte sind nicht bei anderen Anbietern erhältlich. 1. Der MACSQuant Analyzer 16 verbindet eine benutzerfreundliche Automatisierung mit leistungsstarker, durchflusszytometrischer Analyse. Die geringe Stellfläche (67×50 cm) ermöglicht einen Betrieb des Gerätes auf einem normalen Labortisch. Es verfügt über drei Laser (405 nm, 488 nm, 640 nm) für eine stabile und konsistente Lichtdetektion. Darüber erlaubt das Gerät die vollautomatische Verarbeitung von Zellproben, einschließlich